人胚胎絨毛膜細(xì)胞提取物?操作要點(diǎn)

人胚胎絨毛膜細(xì)胞提取物操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

羽扇豆根瘤菌 Bradyrhizobium lupini

羽扇豆根瘤菌 Bradyrhizobium lupini

羽扇豆根瘤菌 Bradyrhizobium lupini

羽扇豆根瘤菌 Bradyrhizobium lupini

羽扇豆根瘤菌 Bradyrhizobium lupini

羽扇豆根瘤菌 Bradyrhizobium lupini