大鼠細胞凋亡相關(guān)因子（Bcl-2）試劑盒操作步驟

大鼠細胞凋亡相關(guān)因子(Bcl-2)試劑盒操作步驟

1.標(biāo)準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

200µg/L5號標(biāo)準品150µl的原倍標(biāo)準品加入150µl標(biāo)準品稀釋液

100µg/L4號標(biāo)準品150µl的5號標(biāo)準品加入150µl標(biāo)準品稀釋液

50µg/L3號標(biāo)準品150µl的4號標(biāo)準品加入150µl標(biāo)準品稀釋液

25µg/L2號標(biāo)準品150µl的3號標(biāo)準品加入150µl標(biāo)準品稀釋液

12.5µg/L1號標(biāo)準品150µl的2號標(biāo)準品加入150µl標(biāo)準品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準孔、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，

然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此

重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止

液后15分鐘以內(nèi)進行。