elisa酶聯(lián)免疫試劑盒抗體定量檢測(cè)方法及其原理

         elisa酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)技術(shù)（elisa試劑盒檢測(cè)方法）是20世紀(jì)60年代末期發(fā)展起來(lái)的一種免疫學(xué)檢測(cè)方法，是目前zui廣泛應(yīng)用的標(biāo)記免疫技術(shù)。1966年Nakene和Pierce共同發(fā)表了《酶標(biāo)抗體：制備和抗原定位中的應(yīng)用》，首先提出了酶聯(lián)免疫技術(shù)（ELISA試劑盒檢測(cè)方法）的基本原理。1971年Engvall和Perlmann發(fā)表《ELISA KIT方法吸附試驗(yàn)測(cè)定IgG含量》一文，使酶聯(lián)免疫（ELISA試劑盒檢測(cè)）技術(shù)成為一種實(shí)用的檢測(cè)液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的方法。目前酶聯(lián)免疫（ELISA試劑盒）檢測(cè)技術(shù)已廣泛用于免疫學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲(chóng)學(xué)等。由于其具有靈敏度高、試劑穩(wěn)定、設(shè)備簡(jiǎn)單、操作安全等優(yōu)點(diǎn)，近幾年也將其應(yīng)用到食品領(lǐng)域中來(lái)檢測(cè)某些食品中的生理活性物質(zhì)。

抗體定量檢測(cè)方法及其原理

定量分析抗體的常用方法有擴(kuò)散法、酶聯(lián)免疫吸附法和火箭免疫電泳法等。

1、免疫擴(kuò)散法

a、單向免疫擴(kuò)散法

原理：將待檢抗原滴加于含相應(yīng)抗體的瓊脂板小孔中，經(jīng)一定時(shí)間擴(kuò)散后。形成乳白色的沉淀壞，在一定濃度范圍內(nèi)，抗原的含量與沉淀壞直徑成正比。可以先用己知不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原制成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，再根據(jù)測(cè)試樣品沉淀環(huán)直徑的大小，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出樣品中抗原的相應(yīng)含量。

b、雙向免疫擴(kuò)散法

原理：可溶性抗原與已知可溶性抗體分別加入相鄰的瓊脂糖凝膠板上的小孔內(nèi)，在電解質(zhì)存在下讓它們相互向?qū)Ψ綌U(kuò)散。當(dāng)兩者在zui適當(dāng)比例處相遇時(shí)，即形成一條清晰的沉淀線(xiàn)。根據(jù)稀釋度與已知標(biāo)準(zhǔn)品稀釋度之比，可計(jì)算出抗體含量。

2、火箭免疫電泳法

原理：抗原在電場(chǎng)力的作用下向前移動(dòng)，當(dāng)抗原在通過(guò)含有一定量單一抗體的瓊脂凝膠時(shí)，即形成抗原抗體復(fù)合物，比例合適即沉淀下來(lái)。因抗體遷移率低，而抗原隨電泳向前移動(dòng)，因而使抗原、抗體形成圓錐形的沉淀峰。在一定濃度范圍內(nèi)，峰的高度與抗原的濃度呈正比。

3、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）
原理：ELISA可用于測(cè)定抗體，也可用于檢測(cè)杭原。其基本原理是采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接，然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測(cè)定。測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。3種必要的試劑： ①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）； ②酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）； ③酶作用的底物（顯色劑）。